PCR-analys: vad är det? Hur du tar PCR-analys

Det är inte så länge sedan utvecklat en pålitlig, mycket känslig och snabb metod för diagnos av olika infektionssjukdomar hos människor. En sådan metod kallas "PCR-analys". Vad är det, vad är dess väsen, vad han kan identifiera mikroorganismer och hur man tar det, kommer vi att beskriva i denna artikel.

History of discovery

Uppfann polymeraskedjereaktionen (PCR) är en amerikansk forskare Keri Myullis 1983. Initialt den patenterade metoden för diagnos av "Cetus Corporation", i vilken han arbetade och dess skapare. Men i 1992 alla rättigheter och patent såldes till företaget "Hoffman-La Roche." Efter det visade det sig att liknande studier genomfördes parallellt och rapporterades av andra amerikanska biologer som Elis Chen, David Edgar, John RRE. 1980 engagerade han i denna fråga och de sovjetiska vetenskapsmän A. Slyusarenko A. Kaledin och S. Gorodetsky. Därför, för att bestämma den enda upphovsrättsinnehavaren har inte varit möjligt. Många framstående biokemister har bidragit till utvecklingen av metoder för polymerasreaktion och CERN patenterade sina innovationer. Vid denna punkt analys av PCR utförs hela specialutrustade laboratorier.

SAMMANFATTNING PCR diagnostisk

PCR-analys: vad är det och hur fungerar det? Det väsentliga i metoden ligger i det faktum att genom att använda ett speciellt enzym-DNA-polymeras in vitro för att öka i volym specifik mikrobiell miljö. För att göra detta flera gånger multiplicera tillgänglig DNA-material. Sålunda kan närvaron av en patogen i ett prov mängden kommer att ökas på bekostnad av biokemiska laboratorie manipulation, och bakterier inte kommer att vara svåra att detektera i mikroskopet.

Hur är studiet av materialet?

För att genomföra den analys som krävs:

• DNA-mallen;
• primrar materialet ansluter ändarna av fragmentet;
• termostabilt DNA-polymerasenzym;
• kemikalier, säkerställa korrekt drift av enzymer;
• buffertlösning krävs för att skapa de rätta förutsättningarna för tillväxt och utveckling av DNA-material.

Att utföra PCR driva 25-30 upprepningar bestående av tre steg: denaturering, annealing och förlängnings.

Att analysera polimezarnoy kedjereaktion med användning av en speciell anordning - cycler. Modern utrustning gör det möjligt att installera den nödvändiga värme- och kylrör program för att eliminera fel under diagnosen.

Vart ska ansökan diagnosen?

Polimezarnoy kedjereaktionsmetoden används i olika medicinska områden:

• Rättsmedicinsk användning det så att den genetiska material, såsom hår, saliv eller blod;
• PCR-analys av blod hjälper till att genotypning, t ex för detektion av individuella genetiska planterade svar på ett specifikt läkemedel;
• genom en metod som familjeband mellan människor;
• mest eftertraktade PCR-förfarande har blivit vid medicinsk diagnos för bestämning av olika infektionssjukdomar.

Vad infektioner avslöjar PCR?

Således medicin har länge använts med framgång PCR-analys. Vad är det, har vi redan lärt. Och vissa patogener kan upptäckas med det? PCR diagnostiseras följande infektioner :

• hepatit A, B, C;
• ureaplasmosis;
• candidiasis;
• chlamydia;
• mykoplasmos;
• bakteriell vaginos;
• infektiös mononukleos;
• trikomonasinfektion;
• HPV-infektion;
• tuberkulos;
• herpesinfektion av 1: a och 2: a typ;
• Helicobacter pylori-infektion;
• cytomegalovirus;
• difteri;
• salmonella;
• HIV-infektion.

Dessutom är PCR-metoder som används vid diagnos av cancer.

fördelarna med förfarandet

Diagnostisk PCR har flera fördelar:

1. Hög känslighet. Även med endast ett fåtal DNA-molekyler mikroorganism PCR-analys bestämmer närvaron av infektion. Det hjälper metod för kroniska och latenta sjukdomar uppstår. Ofta i sådana fall är mikroorganismen obrukad på andra sätt.
2. För att undersöka vilket som helst lämpligt material, såsom saliv, blod, sexuell selektion, hår, epitelceller. Det vanligaste är ett blodprov och urogenital kompress PCR.

3. Inte kräver en utökad växande kulturer. Den automatiserade processen diagnostik gör det möjligt att få resultaten av en studie efter 4-5 timmar.
4. Metoden är nästan helt giltig. Inspelad endast enstaka fall av falskt negativt resultat.
5. Förmåga att identifiera olika typer av patogener i en provmaterial. Detta snabbar inte bara upp processen för diagnos av sjukdomen, men också betydligt minskar materialkostnader. Ofta föreskriver läkaren en omfattande analys av PCR. Prisundersökning, som består av att bestämma de sex patogener är ca 1500 rubel.

Rekommendationer om förberedelse för analys

Resultaten ska gälla PCR studierna måste testas, efter rekommendationer från de preliminära förberedelserna för diagnos:

1. Före leverans av saliven bör avstå från att äta och läkemedel under 4 timmar före provtagning av materialet. Omedelbart före ingreppet, skölja munnen med kokt vatten.
2. Ovanstående regler skall styras och när provtagningen från insidan av kinden. Efter sköljning rekommenderas att utföra en lätt massage på huden för att släppa prostata sekret.
3. Urin brukar samlas hemma. För att göra detta måste du göra en grundlig toalett av könsorganen. I en steril plastbehållare är nödvändigt att samla in 50-60 ml urin. Det rekommenderas för kvinnor att föra in tampongen i slidan, och män så mycket som möjligt att dra hudveck att säkerställa renheten hos materialet. Det går inte att ta materialet under menstruationen.
4. För leverans av sperma att avstå från samlag under de 3 dagarna före insamlingen av materialet. Dessutom är läkare uppmanas att överge användningen av bastun och varma bad, alkohol och kryddstark mat. Under 3 timmar före analys är nödvändigt att avstå från att urinera.
5. Att passera urogenitala smeta, till exempel om analysen på en Chlamydia PCR, är både kvinnor och män rekommenderas att sexuell vila i 3 dagar. 2 veckor före analysen kan inte ta antibiotika. För en vecka måste du sluta använda intima geler, salvor, vaginala suppositorier, douching. 3 timmar före studien bör avstå från att urinera. Under menstruation staket material inte utförs, bara tre dagar efter avslutad spotting kan ta urogenital smear.

PCR under graviditeten

Väntetiden för ett barn, många infektionssjukdomar, sexuellt överförbara sjukdomar, är extremt farligt för normal fosterutveckling. STD kan utlösa intrauterin utveckling, missfall eller för tidig födsel, medfödda missbildningar hos barn. Därför är det viktigt att få i början av graviditeten screening PCR. Pass analys är nödvändig vid registreringen - upp till 12 veckor.

Staket material kommer från cervikalkanalen med speciella borstar. Proceduren är smärtfri och inte utgör någon fara för barnet. Normalt under graviditet analyseras för Chlamydia PCR-metoden, såväl som ureaplasmosis, mykoplasmos, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Sådan undersökning komplex kallas PCR 6.

PCR för diagnos av HIV

Grund av det faktum att metoden för polymeraskedjereaktionen är mycket känslig för förändringar i kroppen och villkoren för diagnos, kan många faktorer påverka resultatet. Därför PCR-analys för HIV-infektion är inte en tillförlitlig metod, dess effektivitet - 96-98%. Resterande 2-4% av test ger falska positiva resultat.

Men i vissa situationer utan PCR diagnosen HIV inte kan göra. Vanligtvis är det transporteras till människor med falskt negativa ELISA. Dessa siffror tyder på att personen ännu inte har utvecklat antikroppar mot viruset och kan inte upptäckas utan att öka antalet av flera. Att detta kan åstadkommas genom att utföra ett blodprov PCR-metod.

Det behövs också är en diagnos av barn första levnadsåret, född till HIV-positiva mödrar. Metoden är det enda sättet att på ett tillförlitligt sätt fastställa status för barnet.

PCR för diagnos av hepatit

Polymeraskedjereaktionsmetod tillåter detektion av DNA av viruset av hepatit A, B, C, väl innan bildandet av antikroppar mot infektion eller symtomdebut. Särskilt effektiv är PCR-analys på hepatit C, eftersom 85% av sådan sjukdom är asymtomatiska och utan snabb behandling blir kronisk.

Tid upptäcka patogenen kommer att bidra till att undvika komplikationer och långtidsbehandling.

Integrerad PCR-screening

Omfattande PCR-analys: vad är det? Denna screeningsmetod polimezarnoy kedjereaktion som innefattar att bestämma samtidigt flera arter infektion: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealitikum, herpes 1:a och 2:a typ, gonorré papillomavirus. Priset för denna diagnos varierar från 2000 till 3500 rubel. beroende på klinik, material och utrustning, såväl som på den typ av analys: kvalitativ eller kvantitativ. Vad som behövs i ditt fall - läkaren bestämmer. I vissa fall kan du helt enkelt upptäcka närvaron av patogenen i andra, såsom HIV, den viktiga roll som spelas av kvantitativa titer. kallad "PCR-analys av 12" vid diagnos av alla ovanstående patogener undersökning.

Dechiffrera analysresultaten

Transkription PCR-analys är enkel. Det finns bara två index skala - "negativa" "positiv" och Vid detektering av patogenen kan läkare med 99% konfidensintervall: te bekräfta närvaron av sjukdomen och för att påbörja behandling av patienten. I den kvantitativa metoden för att bestämma infektion i en motsvarande kolumn index antalet detekterade bakterier kommer att specificeras. Endast en läkare kan avgöra omfattningen av sjukdomen och ordinera nödvändig behandling.

I vissa fall, till exempel för att bestämma HIV-infektion genom PCR, med ett negativt resultat, det finns ett behov av ytterligare undersökningar för att bekräfta dessa siffror.

Om att få testat?

Var pass-PCR-analys i den offentliga klinik eller ett privat laboratorium? Tyvärr, i den kommunala medicinska institutioner utrustning och metoder ofta föråldrade. Därför är det bättre att ge företräde åt privata laboratorier med modern utrustning och mycket kvalificerad personal. Dessutom i en privat klinik du får de resultat mycket snabbare.

I Moskva, många privata laboratorier erbjuder PCR-analys för olika infektioner. Till exempel i sådana kliniker som "Vita", "Integrated Clinic", "Happy Family", "Uro-Pro", genomförs PCR-analys. Survey priset är 200 rubel. för bestämning av en patogen.

Det kan konstateras att diagnosen av infektionssjukdomar med PCR i de flesta fall är ett snabbt och tillförlitligt sätt att upptäcka patogenen i kroppen vid de tidiga stadierna av infektion. Men i vissa fall, att välja andra metoder för diagnos. Avgöra behovet av en sådan studie kan bara vara en specialist. PCR-analys dekryptering kräver också ett professionellt förhållningssätt. Följ din läkares råd och inte ger sina egna tester, som inte behövs.